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孔雀石綠檢測(cè)試劑盒

更新時(shí)間:2025-06-04

簡(jiǎn)要描述:

孔雀石綠檢測(cè)試劑盒經(jīng)營(yíng)原則是“質(zhì)量*,誠(chéng)信*",以“質(zhì)量是企業(yè)的生命,誠(chéng)信是經(jīng)營(yíng)的資本"為警醒,嚴(yán)把商品質(zhì)量關(guān),不做任何有損顧客利益的事情,經(jīng)濟(jì)、實(shí)惠、可靠,完善、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)體系,優(yōu)秀的科研隊(duì)伍,的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,是您可靠的合作伙伴。

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            孔雀石綠檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)(酶聯(lián)免疫法)
 

 1 原理及用途
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,同時(shí)把隱性孔雀石綠氧化成孔雀石綠,可檢測(cè)動(dòng)物組織和水樣中的孔雀石綠(Malachite Green,MG)總量。試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的孔雀石綠和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗孔雀石綠抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含孔雀石綠含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中孔雀石綠的殘留量。
2 孔雀石綠檢測(cè)試劑盒技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度:0.05ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式:37℃,10min~30min~30min~15min
2.3 檢測(cè)下限:
魚(yú)/蝦等水產(chǎn)品 ……………0.5ppb
水樣 …………………………0.1ppb
2.4 交叉反應(yīng)率:
顯性孔雀石綠………………………100%
結(jié)晶紫………………………………91%
隱性孔雀石綠(氧化后)…………100%
隱性結(jié)晶紫(氧化后)……………91%
 2.5 樣本回收率:
魚(yú)/蝦等水產(chǎn)品、水樣……………90%±10%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板………………………………96孔
10×標(biāo)準(zhǔn)品(棕色蓋):各0.5ml
0ppb、0.5ppb、1ppb、2ppb、4ppb、8ppb
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(藍(lán)蓋)………………10ml
10×濃縮酶結(jié)合物…………………1.6ml
10×濃縮抗體……………………0.8ml
底物液A(白蓋)………………………7ml
底物液B(黑蓋)………………………7ml
終止液(黃蓋)………………………7ml
10X濃縮洗滌液(白蓋)……………50ml
樣本稀釋緩沖液(紅蓋)………………5ml
氧化劑(黑蓋)…………………………3ml
說(shuō)明書(shū) ………………………………1份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)、恒溫箱
4.2 微量移液器:?jiǎn)蔚?0µl-200µl、100µl-1000µl、多道300µl
4.3 試劑:乙腈、乙酸、二氯甲烷、無(wú)水硫酸鈉、中性氧化鋁、正己烷
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知:
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.2 配液:
配液1:樣本提取液
    首先將乙腈與二氯甲烷配成體積比為2:1混合液,然后向上述混合液中加入乙酸,使其終濃度約為1%,按需配制。(例:100ml 乙腈+50ml 二氯甲烷+1.5ml 乙酸。)
5.3 樣本前處理步驟:
5.3.1 低脂肪含量樣品(羅非魚(yú)、鯽魚(yú)、鰱魚(yú)、鳙魚(yú)、草魚(yú)、蝦、鯉魚(yú)等)
1)魚(yú)蝦去皮取肉,用勻漿器均質(zhì)樣品;
2)稱(chēng)取2g均質(zhì)好的樣品,放入50ml離心管中,加入10ml樣本提取液(配液1),立即搖勻,加入1g無(wú)水硫酸鈉,充分震蕩10min,4000r/min 離心5 min;
3)取7ml上清移至50ml離心管中,加入20ul氧化劑,震蕩2min,加入7ml 正己烷,顛倒混勻1min,4000r/min離心5min。
4)取下層5ml,50-60℃下氮?dú)獯蹈伞<尤?00ul 乙腈,渦旋使殘?jiān)芙猓ㄗ⒁馍w緊蓋防止乙腈揮發(fā)掉)。
5)測(cè)定時(shí)取上述乙腈溶解液25ul,加50ul樣本稀釋緩沖液,175μl 蒸餾水,混合均勻,取50ul分析。
    樣本稀釋倍數(shù):3     檢測(cè)下限:0.5ppb
5.3.2 高脂肪含量樣品(鰻魚(yú)、鯰魚(yú)等)
1)魚(yú)蝦去皮取肉,用勻漿器均質(zhì)樣品;
2)稱(chēng)取2g均質(zhì)好的樣品,放入50ml離心管中,加入10ml樣本提取液(配液1),立即搖勻,再加入1g中性氧化鋁、1g無(wú)水硫酸鈉,充分震蕩5min,4000r/min 離心5 min;
3)取7ml上清移至50ml離心管中,加入20ul氧化劑,震蕩2min,加入7ml 正己烷,顛倒混勻1min,4000r/min離心5 min。
4)棄去全部上層正己烷層(注:中間蛋白脂肪層需棄除),再加入7ml 正己烷,顛倒混勻1min,4000r/min 離心5min; 
5)取下層5ml,50-60℃下氮?dú)獯蹈?,加?00ul 乙腈,渦旋使殘?jiān)芙猓ㄗ⒁馍w緊蓋防止乙腈揮發(fā)掉)。
6)測(cè)定時(shí)取上述乙腈溶解液25ul,加50ul樣本稀釋緩沖液,175ul 蒸餾水,混合均勻,加入500ul正己烷渦旋2min,棄去全部上層正己烷,取下層50ul分析。
    樣本稀釋倍數(shù):3     檢測(cè)下限:0.5ppb
5.3.2水質(zhì)樣品
取水樣175ul, 加入50ul 樣本稀釋緩沖液, 25ul 乙腈,取50ul分析。 
樣本稀釋倍數(shù):1.43    檢測(cè)下限:0.1ppb
注:此方法所得到的結(jié)果為孔雀石綠;隱性孔雀石綠;結(jié)晶紫;隱性結(jié)晶紫的總量。
6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前需:
配液A:洗滌工作液
將50ml 10×濃縮洗滌液用去離子水按1:9稀釋成500ml工作洗滌液備用。
配液B:活化劑工作液
將氧化劑按1:99體積進(jìn)行稀釋?zhuān)ìF(xiàn)用現(xiàn)配,按需配制)
配液C:抗體工作液
用配液A(洗滌工作液)將10×濃縮抗體10倍稀釋?zhuān)ㄅR時(shí)用時(shí),按需配制)
配液D:酶標(biāo)記物
用配液A(洗滌工作液)將10×濃縮酶結(jié)合物10倍稀釋?zhuān)ㄅR時(shí)用時(shí),按需配制)
制備孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)液:
標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0ppb,0.05ppb,0.1ppb,0.2ppb,0.4ppb,0.8ppb)
取6個(gè)1.5ml離心管,把標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋10倍(如:450ul標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液加入50ul 10×標(biāo)準(zhǔn)品濃縮液)
6.1 編 號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 活化:加120ul活化劑工作液(配液B)到微孔中,室溫下反應(yīng)10min,倒掉拍干,加洗滌工作液(配液A)250ul/孔,洗滌5次,每次間隔30s,棄去孔中液體,在吸水紙上拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過(guò)的吸頭戳破)。
6.3 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加抗體工作液50µl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,37℃避光反應(yīng)30分鐘。
6.4 洗 滌:將孔內(nèi)液體甩干,用洗滌液工作液250µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,zui后用吸水紙拍干。
6.5 加酶反應(yīng):加酶標(biāo)記物100µl/孔,37℃避光反應(yīng)30分鐘。
6.6 洗  滌:同上
6.7 顯    色:加底物液A 50µl/孔,再加底物液B 50µl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,37℃避光顯色15分鐘。
6.8 終    止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
6.9 測(cè)吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm)。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計(jì)算
    標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即
 百分吸光度值(%)=
A
×100%
A0
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
    以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。
    若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(索?。?br />8 注意事項(xiàng)
8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
8.2 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
8.3 混合要均勻,洗板要*,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的*性。
8.4 在所有孵育過(guò)程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。
8.5 不要使用過(guò)了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm< 0.5 )時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。

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