91蜜桃-91免费版黄片-91免费播放-91免费电影-91免费短视频-91免费福利网-91免费国产-91免费黄色

一般咱們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或安排勻漿液等，不同類型的檢測樣本前期的處理辦法是不一樣的。正確的處理樣本是確保ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的*步，下面簡略介紹一下不同類型的樣本的處理辦法。

1、  血清

血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本，處理也比較簡略。

用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管搜集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃一個晚上，使血清分出。（將試管或離心管歪斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的分出。）4℃ 1000×g離心20分鐘，仔細(xì)搜集上清。主張將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，防止重復(fù)凍融。

采血過程中應(yīng)防止溶血，由于紅細(xì)胞裂解時會開釋具有過氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色，而導(dǎo)致檢測的不準(zhǔn)確性。一起也應(yīng)防止細(xì)菌污染，由于菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP然后導(dǎo)致檢測的假陽性。

2、  血漿

用含抗凝劑的采血管或離心管搜集血液標(biāo)本，標(biāo)本搜集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，防止重復(fù)凍融。防止運用溶血或高血脂的標(biāo)本。

常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等，檢測時還應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑盒說明書，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。

3、  細(xì)胞培養(yǎng)上清

取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管，1000×g離心20min，除掉細(xì)胞碎片及雜質(zhì)，取上清，-20℃或-80℃保存，防止重復(fù)凍融。

4、  細(xì)胞裂解液

1）  吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，用胰酶消化細(xì)胞，加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省掉。

2）  搜集細(xì)胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS潤洗3次。

3）  參加適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液（臨用前參加蛋白酶按捺劑）重懸細(xì)胞。一般6孔板一個孔的細(xì)胞量需求150~250μL PBS重懸。

4）  將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫凍結(jié)樣品，重復(fù)凍融幾回，使細(xì)胞充沛裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎，以到達(dá)裂解的意圖。

5）  4℃ 10000×g 離心10min，除掉細(xì)胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，防止重復(fù)凍融。

5、安排勻漿液

1）  將安排樣本用PBS (0.01錨點錨點M, PH 7.4) 沖刷，洗去安排表面殘留的血液或雜質(zhì)。

2）  將安排塊稱重，記錄后剪碎，碎塊應(yīng)盡量小，便于勻漿得更充沛

3）  將安排按必定的份額參加預(yù)冷的PBS（臨用前參加蛋白酶按捺劑）勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中。（一般按安排分量：PBS體積=1:9的份額勻漿，例如1g的安排樣本對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需求恰當(dāng)調(diào)整，檢測后核算樣品濃度時應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)）

4）  汲取勻漿液到離心管，4℃ 5000×g 離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，防止重復(fù)凍融。

6、  尿液、唾液等其他液體生物樣本

1000×g離心20min，取上清即可檢測。

總的來說，由于ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量，所以應(yīng)確保一切樣本均為弄清的液體，沉積或懸浮物都應(yīng)離心去除。

為了確保檢測的準(zhǔn)確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內(nèi)檢測；4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。別的，還應(yīng)確保樣本不含NaN3，由于NaN3會按捺HRP的活性，然后導(dǎo)致假陰性的成果。